產(chǎn)品詳情
簡單介紹:
血液基因組DNA大量提取試劑盒(1-20ML)本試劑盒適用于各種新鮮及抗凝劑(檸檬酸鈉、EDTA 等)處理過的全血基因組 DNA 大量提取。DNA 特異吸附到硅膠膜上,通過簡單漂洗去除雜質(zhì),可快速純化得到基因組 DNA 。使用本試劑盒得到的血液基因組 DNA 無蛋白、核酸酶污染,可直接進行 PCR 、 酶切和雜交等分子生物學實驗。
詳情介紹:
產(chǎn)品及特點
本試劑盒適用于各種新鮮及抗凝劑(檸檬酸鈉、EDTA 等)處理過的全血基因組 DNA 大量提取。DNA 特異吸附到硅膠膜上,通過簡單漂洗去除雜質(zhì),可快速純化得到基因組 DNA 。使用本試劑盒得到的血液基因組 DNA 無蛋白、核酸酶污染,可直接進行 PCR 、 酶切和雜交等分子生物學實驗。
它具有下列特點:
它具有下列特點:
1. 操作簡便:無需有機試劑沉淀,可快速獲得高純度的血液基因組 DNA;
2. 純度高:去除污染物和抑制劑徹底,便于下游應用。
成分規(guī)格
Buffer GTL |
110ml |
550ml |
Buffer GL |
110ml |
550ml |
10×紅細胞裂解液 RBL |
50ml |
250ml |
Buffer EB |
10ml |
50ml |
Buffer W1(concentrate) |
26ml |
2×52ml |
Buffer W2(concentrate) |
60ml |
4×60ml |
Proteinase K |
2×1ml |
10×1ml |
Spin Columnwith Collection Tubes |
10套 |
50套 |
蛋白酶K 于-20℃, 其他組分室溫(15 - 25℃),可保存 12 個月 |
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本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于其它用途 |
使用方法
自備試劑
無水乙醇、RNase A(可選)。
(注 意:a.使用前請先在緩沖液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶上的標 簽; b.把 10×紅細胞裂解液 RBL 稀釋成 1×工作液)
1. 處理樣品:取 10-20 ml 全血于 50 ml 離心管中,加入 1.5 倍體積細胞裂解液 RBL 顛倒混勻 10 次,5,000 rpm 離心 3 min ,倒棄上清;重復 1-2 次,直到紅細胞充分裂解;
(注 意:細胞裂解液 RBL 處理步驟應小心操作,為避免沉淀被倒出,推薦使用尖底離心管。在極少 的情況下細胞裂解液 RBL 處理得到的沉淀可能會很松弛,所以要緩慢倒上清。)
2. 加入 200ul Proteinase K 和 10 ml 緩沖液 GTL,立即上下劇烈震蕩或渦旋混勻至溶液混 合均勻。
3. 加入 10ml Buffer GL 渦旋混勻。
4. 56℃水浴 10-30 min。每隔 3 min 振蕩一次,以助裂解,如遇特殊樣本,未能很好裂解, 請適當延長孵育時間。
5. 加入 20 ml 無水乙醇,充分震蕩,短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁液體。
6. 將吸附柱放入收集管,將上一步所得溶液分次加入吸附柱中,10,000 rpm 離心 1 min, 棄收集管中濾液。
7. 向吸附柱內(nèi)加入 10 ml Buffer W1 ,室溫 10,000 rpm 離心 1 min ,棄收集管中濾液。
(注 意:按要求在 Buffer W1 中加入無水乙醇,用后及時蓋緊, 以防乙醇揮發(fā))
8. 向吸附柱內(nèi)加入 10 ml Buffer W2 ,室溫 10,000 rpm 離心1min ,棄收集管中濾液。
(注 意:Buffer W2 是濃縮液,按要求加入無水乙醇,用后及時蓋緊, 以防乙醇揮發(fā))
9. 向吸附柱內(nèi)加入 5 ml Buffer W2 ,室溫 10,000 rpm 離心10 min ,棄收集管中廢液。
(注 意:此步不能省略,否則殘留乙醇會影響基因組 DNA 的后續(xù)使用)
10. 將離心吸附柱置于一個新的 15 ml 塑料離心管(自備)中,開蓋于空氣中 5min ,加入 300-1000 ul Buffer EB,室溫放置 5 min ,10,000 rpm 離心 2 min,離心管底溶液即基因 組 DNA。
(注 意:為增加洗脫效率,可將洗脫液 Buffer EB 在 60℃預熱。如需使用去離子水洗脫,可用 NaOH 調(diào)整其pH 值在7.0 - 8.5 之間,為了增加回收率,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,室溫放置2 min, 再次離心收集)
注意事項
1. 如 Buffer GTL產(chǎn)生沉淀,可在 56℃水浴溶解。
2. 樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的 DNA 片段小,提取量下降。
3. 所有離心步驟均為臺式離心機,室溫下操作。
4. 按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入無水乙醇。