ELISA細(xì)胞裂解液詳細(xì)步驟

常規(guī)樣本處理方式
血液樣本
血液樣本分為全血、血漿、血清三種。簡(jiǎn)單描述:
全血: 全血=血漿+血細(xì)胞。
血漿: 全血加抗凝劑后離心分離出來(lái)的淡黃色液體是血漿。
血清: 全血不加抗凝劑而自然凝固后分離出來(lái)的，不含纖維蛋白原的淡黃色液體是血清。
血液樣本是ELISA/液相實(shí)驗(yàn)常用的樣本。在收集血液樣本的過(guò)程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞在溶解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，將會(huì)出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng)，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。另外，樣本還需要避免污染，因?yàn)槠淇赡軙?huì)導(dǎo)致樣本含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。且要避免使用高血脂樣本。脂質(zhì)會(huì)影響抗原抗體的結(jié)合，從而影響測(cè)值的準(zhǔn)確性。
3.細(xì)胞裂解液
①吸出培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，再加入適量的培養(yǎng)基，將培養(yǎng)板上的細(xì)胞沖洗干凈(懸浮細(xì)胞可以省略該步驟);
②將細(xì)胞懸浮液收集到離心管中，在2-8C條件下，以1000xg離心5分鐘，再吸去培養(yǎng)基，用預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞3次;
③加入適量的預(yù)冷PBS(建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑)，重懸細(xì)胞。添加比例:約1x106個(gè)細(xì)胞加入150-250uLPBS重懸細(xì)胞;
④使樣本在-20°C或-80°℃條件和室溫條件下反復(fù)凍融，重復(fù)凍融過(guò)程數(shù)次，直至細(xì)胞完全裂解。也可使用超聲波細(xì)胞破碎器，超聲處理懸浮液來(lái)裂解細(xì)胞;
⑤2-8°℃條件下，以1500xg離心10分鐘，去除細(xì)胞碎片，收集上清液。