elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)用技巧

elisa試劑盒包含了抗原、抗體、活性介質(zhì)和酶等組分，當(dāng)抗原抗體相互結(jié)合時(shí)，就會形成抗原抗體復(fù)合物。當(dāng)復(fù)合物中含有活性介質(zhì)時(shí)，它可以使一種特定的酶有活性，這種酶可以將抗原和抗體中的某一物質(zhì)催化變成另一物質(zhì)，產(chǎn)生具有一定的吸光度的產(chǎn)物，這就是elisa 試劑盒的基本原理。
由于elisa 試劑盒的容易操作、易于反應(yīng)性能進(jìn)行管理和檢測，以及檢測準(zhǔn)確、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)，它成為目前應(yīng)用為廣泛的免疫學(xué)技術(shù)之一，是診斷和檢測抗原抗體的有力工具。
試劑的準(zhǔn)備
按elisa試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。LIS中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
加樣
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。
加標(biāo)本一般用微量加樣器，按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。
保溫
在ELISA中通常有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。