選擇適合的ELISA試劑盒要考慮哪些參數(shù)呢
具體參數(shù)如下：
參數(shù) 靈敏度 動態(tài)范圍 批內(nèi)精度 CV (%) 批間精度 CV (%) 特異性 回收率 (%) 稀釋線性讓我們來了解靈敏度 動態(tài)范圍 特異性 回收率 (%) 稀釋線性
一：ELISA試劑盒的靈敏度
靈敏度是ELISA試劑盒抗體對可檢測的zui低蛋白水平。
二：ELISA試劑盒的動態(tài)范圍
動態(tài)范圍是檢測可準確量化的靶蛋白高濃度到低濃度區(qū)間。了解樣品中預(yù)計的靶蛋白水平非常重要，這可以幫助檢查給定的 ELISA 試劑盒靈敏度及動態(tài)范圍是否合適。如果樣品靶蛋白濃度很高，可以對樣品進行稀釋，以確保原始信號在測定的動態(tài)范圍之內(nèi)。當檢測實驗中有兩個參數(shù)時，簡單的用標準蛋白來測定濃度往往會不準確。因為這很可能無法反應(yīng)出樣本中內(nèi)源蛋白的動態(tài)變化。
確保ELISA試劑盒使用的抗體不與非靶蛋白進行交叉反應(yīng)，這點非常重要。這些可能是不同物種間的高同源性蛋白。比如，人體因子 IX SimpleStep ELISA? 試劑盒(ab188393)特異于人體因子 IX 且不與小鼠、大鼠、兔子、山羊、豚鼠、倉鼠、牛、狗或豬樣本發(fā)生反應(yīng)。
回收率(%)是通過給一份生物樣品類型（同時也稱樣品基質(zhì)）里加入已知數(shù)量的純化靶蛋白而確定的。對于分泌蛋白，比如細胞因子，常見的樣品基質(zhì)有血漿及血清；對于細胞內(nèi)蛋白，比如激酶，樣品是細胞培養(yǎng)裂解物。測量ELISA中的加標樣品，并通過標準曲線計算濃度。將計算的濃度與已知的蛋白濃度進行比較，以百分比的形式呈現(xiàn)。比如，100% 回收率表示觀察濃度與樣品里加標蛋白的實際濃度一致。這表明同一樣品類型中的其它蛋白及分子并未干擾靶蛋白的量化。如果對于某一特定樣品類型，回收率測量值小于 80%，則需要選取另一套不同的 ELISA 試劑盒以供量化。
稀釋線性與回收率彼此相輔相成，因為它主要測量了生物樣品里的天然蛋白，而非加標蛋白。稀釋線性是根據(jù)ELISA測量的已知陽性樣品中的不同稀釋度來確定的。靶蛋白濃度通過將稀釋因子乘以計算所得濃度來確定。為獲取zui佳結(jié)果，所有稀釋液的樣品濃度都應(yīng)保持一致。如果發(fā)現(xiàn)與未稀釋樣品的差異超過20%，則需要選取其它ELISA試劑盒來做精準定量。