今天，我公司技能專員特意為我們預(yù)備十幾條
ELISA試劑盒操作的要點(diǎn)細(xì)節(jié)，閱覽之后可以總結(jié)一下您在試驗(yàn)中有哪些要點(diǎn)被忽略掉了。熱愛(ài)ELISA試驗(yàn)的新手們需留意這些細(xì)節(jié)：
1.不管是
試劑盒，仍是其它產(chǎn)品，在運(yùn)用之前我們都要仔細(xì)閱覽闡明書(shū)。
2.相同的，必定要確認(rèn)試劑盒是不是在有效期內(nèi)。
3.按闡明書(shū)確認(rèn)一切試劑齊全(數(shù)量、體積)。
4.標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法試驗(yàn)者，留意低溫保存。
5.ELISA試驗(yàn)中為了確認(rèn)信號(hào)和低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測(cè)抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)試驗(yàn)中進(jìn)行互相相抗的滴定。一起，應(yīng)包含在恰當(dāng)規(guī)模內(nèi)的規(guī)范品的系列稀釋。按試劑闡明書(shū)常規(guī)提供的規(guī)模進(jìn)行操作。
6.規(guī)范品的制造：關(guān)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱覽闡明書(shū)，留意每批的細(xì)節(jié)。在運(yùn)用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其間的細(xì)胞因子。根據(jù)每批闡明書(shū)中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
7.一般待測(cè)抗原規(guī)范曲線的線性規(guī)模的可通過(guò)將規(guī)范品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml?？衫靡?guī)范的ELISA試劑盒操作流程、擴(kuò)大試劑盒、第三類試劑、或改動(dòng)酶底物體系可在必定規(guī)模內(nèi)提高靈敏度。
8.根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確認(rèn)所需試劑的量。
9.按闡明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，制造所需試劑，DIY夾心法ELISA常見(jiàn)技能攻略。
10.挑選抗體時(shí)挑選一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì)；若挑選兩個(gè)單抗，有必要辨認(rèn)不同表位的抗體；從同一家公司挑選抗體對(duì)。
11.為了優(yōu)化靈敏度，建議過(guò)夜孵育規(guī)范品和標(biāo)本。
12.若運(yùn)用過(guò)氧化物酶作為顯色體系，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。
13.當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
14.預(yù)備好一切試驗(yàn)額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等。
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