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ELISA實(shí)驗(yàn)中檢測抗原的方法
日期：2024-12-22 16:54
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摘要：1、ELISA試劑盒雙抗體夾心法
針對至少2個抗原決議簇的多價抗原。首要介紹一下抗原決議簇，抗原決議簇便是決議抗原性的特殊化學(xué)基團(tuán)，也叫抗原表位，理論上一個抗原決議簇能誘導(dǎo)產(chǎn)生一種單克隆抗體。由6－12氨基酸或碳水基團(tuán)組成，它可以是由接連序列（線性表位）組成或由不接連的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)（構(gòu)象表位）組成。臨床上具有2個抗原決議簇的多價抗原有很多，比較常見有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。檢測進(jìn)程也簡略，便是包被、洗刷、加樣、洗刷、加樣、洗刷、顯色。具體說來是先將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，再參加待測樣品，若...
1、ELISA試劑盒雙抗體夾心法
針對至少2個抗原決議簇的多價抗原。首要介紹一下抗原決議簇，抗原決議簇便是決議抗原性的特殊化學(xué)基團(tuán)，也叫抗原表位，理論上一個抗原決議簇能誘導(dǎo)產(chǎn)生一種單克隆抗體。由6－12氨基酸或碳水基團(tuán)組成，它可以是由接連序列（線性表位）組成或由不接連的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)（構(gòu)象表位）組成。臨床上具有2個抗原決議簇的多價抗原有很多，比較常見有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。檢測進(jìn)程也簡略，便是包被、洗刷、加樣、洗刷、加樣、洗刷、顯色。具體說來是先將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，再參加待測樣品，若其中含有待測抗原就會與固相抗體結(jié)合，洗掉雜質(zhì)后，再參加酶符號的檢測抗體進(jìn)行反響，洗掉多于的酶標(biāo)抗體后，參加底物顯色，顯色與否以及顏色的深淺就代表了待測抗原是否存在以及相對含量。
（2）假如檢測的樣本是血清，就要留意風(fēng)濕病患者體內(nèi)內(nèi)風(fēng)濕因子RF這種奇葩異種抗體的存在，它可以結(jié)合固相抗體和檢測抗體，形成假陽性的不佳成果。
（3）包被的固相抗體含量一定是高于樣品中的抗原含量，否則檢測到的含量會比實(shí)踐含量低。
（4）假如想優(yōu)異省事一些，將待測樣品與酶標(biāo)檢測抗體一起參加固相載體，在酶標(biāo)檢測抗體高于樣品中的待測抗原的情況下呈現(xiàn)假陰性成果，這種現(xiàn)象書本叫鉤狀效應(yīng)。
2、ELISA試劑盒競爭法
針對小分子抗原。這種辦法也可以用于大分子抗原，僅僅相對雙抗夾心法這種強(qiáng)悍的策略，競爭法完全沒有優(yōu)勢，所以競爭法只在檢測小分子這個邊際地帶發(fā)揮余熱了。臨床上首要用于T3、T4、孕酮等激su以及藥wu等。檢測進(jìn)程與雙抗夾心法更簡略，包被、洗刷、加樣、洗刷、顯色，少了一步加樣的進(jìn)程，可是規(guī)劃上復(fù)雜一些，首要將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，然后每組樣本需求分兩組，一組一起參加事前混勻好的酶標(biāo)檢測抗原和樣本的混合物，一組只參加酶符號抗原，兩組顏色差便是待測抗原的含量。
關(guān)于競爭法也需求留意一點(diǎn)，酶符號抗原和待測樣本一定要事前混勻好，然后一起參加固相載體，否則會形成不公平競爭，檢測呈現(xiàn)誤差。
針對至少2個抗原決議簇的多價抗原。首要介紹一下抗原決議簇，抗原決議簇便是決議抗原性的特殊化學(xué)基團(tuán)，也叫抗原表位，理論上一個抗原決議簇能誘導(dǎo)產(chǎn)生一種單克隆抗體。由6－12氨基酸或碳水基團(tuán)組成，它可以是由接連序列（線性表位）組成或由不接連的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)（構(gòu)象表位）組成。臨床上具有2個抗原決議簇的多價抗原有很多，比較常見有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。檢測進(jìn)程也簡略，便是包被、洗刷、加樣、洗刷、加樣、洗刷、顯色。具體說來是先將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，再參加待測樣品，若其中含有待測抗原就會與固相抗體結(jié)合，洗掉雜質(zhì)后，再參加酶符號的檢測抗體進(jìn)行反響，洗掉多于的酶標(biāo)抗體后，參加底物顯色，顯色與否以及顏色的深淺就代表了待測抗原是否存在以及相對含量。
關(guān)于雙抗體夾心法檢測大分子抗原要留意幾點(diǎn)：
（1）固相抗體和酶標(biāo)檢測抗體一定是別離針對待測抗原的兩個不同抗原決議簇，否則兩個抗體就會為爭同一個決議簇而打架，會呈現(xiàn)假陰性的不佳成果。（2）假如檢測的樣本是血清，就要留意風(fēng)濕病患者體內(nèi)內(nèi)風(fēng)濕因子RF這種奇葩異種抗體的存在，它可以結(jié)合固相抗體和檢測抗體，形成假陽性的不佳成果。
（3）包被的固相抗體含量一定是高于樣品中的抗原含量，否則檢測到的含量會比實(shí)踐含量低。
（4）假如想優(yōu)異省事一些，將待測樣品與酶標(biāo)檢測抗體一起參加固相載體，在酶標(biāo)檢測抗體高于樣品中的待測抗原的情況下呈現(xiàn)假陰性成果，這種現(xiàn)象書本叫鉤狀效應(yīng)。
2、ELISA試劑盒競爭法
針對小分子抗原。這種辦法也可以用于大分子抗原，僅僅相對雙抗夾心法這種強(qiáng)悍的策略，競爭法完全沒有優(yōu)勢，所以競爭法只在檢測小分子這個邊際地帶發(fā)揮余熱了。臨床上首要用于T3、T4、孕酮等激su以及藥wu等。檢測進(jìn)程與雙抗夾心法更簡略，包被、洗刷、加樣、洗刷、顯色，少了一步加樣的進(jìn)程，可是規(guī)劃上復(fù)雜一些，首要將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，然后每組樣本需求分兩組，一組一起參加事前混勻好的酶標(biāo)檢測抗原和樣本的混合物，一組只參加酶符號抗原，兩組顏色差便是待測抗原的含量。
關(guān)于競爭法也需求留意一點(diǎn)，酶符號抗原和待測樣本一定要事前混勻好，然后一起參加固相載體，否則會形成不公平競爭，檢測呈現(xiàn)誤差。