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帶您了解ELISA實(shí)驗(yàn)操作過程的九點(diǎn)要素

日期：2024-12-22 19:59
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摘要：大部分elisa檢測(cè)均以血清為標(biāo)本，那么在ELISA實(shí)驗(yàn)過程中血清標(biāo)本有哪些注意事項(xiàng)呢？ 具體注意事項(xiàng)： 1、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。 2、血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時(shí)間保存，應(yīng)在-70℃以下。 3、冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。

ELISA實(shí)驗(yàn)過程中，操作過程中有一些易被人們忽視小細(xì)節(jié)，但這些小細(xì)節(jié)卻對(duì)試驗(yàn)結(jié)果會(huì)產(chǎn)生直接影響。以下是ELISA控制操作過程的九點(diǎn)要素：



一、嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。

二、加樣后及時(shí)放人孵箱。標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。

三、封板溫育時(shí)，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

四、用洗板機(jī)洗板時(shí)，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

五、合理安排檢測(cè)量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。

六、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

七、顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。

八、加樣時(shí)保持顯色劑不外流；A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

九、應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔，整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測(cè)的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

以上是ELISA實(shí)驗(yàn)操作過程你了解了嗎？

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