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ELISA試劑盒有什么成功秘笈你知道嗎？
日期：2024-12-23 02:40
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摘要：ELISA試劑盒有什么成功秘笈你知道嗎？
ELISA試劑盒作為經(jīng)典常用的免yi檢測(cè)方法，看起來(lái)很平常，然而真正做好它并不容易。選擇比較成熟的公司是你不二的選擇。讓通蔚實(shí)業(yè)技術(shù)員告訴你ELISA秘笈：
1. 實(shí)驗(yàn)前要準(zhǔn)備好相應(yīng)的對(duì)比試劑
提前將所有試劑平衡到相應(yīng)的室溫環(huán)境，這個(gè)過(guò)程需要您的耐心等待。洗液是濃縮液，如有結(jié)晶析出，需完全溶解后再進(jìn)行稀釋。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液。為保證蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制質(zhì)量。溶解后如需保存，按每次使用量分裝后根據(jù)說(shuō)明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，建議用聚丙烯管（對(duì)蛋白吸附力很低），為了確保梯度的準(zhǔn)確性， 每步都要充分混勻且更換新槍頭。
ELISA試劑盒的定量檢測(cè)范圍需參考標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線和濃度區(qū)間內(nèi)屬于線性范圍，其中的值是可信和可定量的。濃度高于線性范圍的樣品要稀釋到線性范圍內(nèi)來(lái)測(cè)量，而濃度低于線性范圍的樣品，其測(cè)量值不能用于計(jì)算濃度，只能用做參考。有一種常見的相關(guān)情況是：健康人樣本中很多標(biāo)志物的濃度偏低，測(cè)量值低于標(biāo)準(zhǔn)曲線值。
以血清為例，樣本收集需注意以下要點(diǎn)。樣本盡量用無(wú)菌管收集，避免xi菌的酶類和代謝產(chǎn)品對(duì)結(jié)果的影響。采集過(guò)程要避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞溶解釋放的活性物質(zhì)可能會(huì)影響檢測(cè)。保存過(guò)程中如有沉淀，應(yīng)離心后取上清液。樣本拿到之后應(yīng)立即測(cè)定，建議按照說(shuō)明書的使用量分裝保存在-20℃，每次檢測(cè)使用一管，即避免交叉污染和反復(fù)凍融，有能保證檢測(cè)結(jié)果的平行可比性。
常見樣本類型有血清，血漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清，如果是廠家實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)的，可根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明購(gòu)買使用?！咀⒁猓貉獫{制備用到的抗凝劑有 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等多種，相應(yīng)的血漿性質(zhì)存在差異，需單獨(dú)確認(rèn)兼容性】。
相關(guān)設(shè)備包括移液器、洗板機(jī)/搖床和酶標(biāo)儀。移液器的準(zhǔn)確性對(duì)于ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性十分關(guān)鍵，需要確保定期校準(zhǔn)維護(hù)。搖床的使用是為了讓反應(yīng)體系快速達(dá)到平衡，獲得穩(wěn)定、可重復(fù)的結(jié)果。不用搖床對(duì)實(shí)驗(yàn)通常的影響是，OD 值低，CV 大。酶標(biāo)儀等設(shè)備使用前提前 15 分鐘開機(jī)預(yù)熱。