產(chǎn)品中心
產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：即用型易錯(cuò)PCR試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào)： 100T
  • 產(chǎn)品廠商：通蔚生物
  • 產(chǎn)品價(jià)格：1918
  • 產(chǎn)品庫存：121
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡單介紹：
即用型易錯(cuò)PCR試劑盒易錯(cuò) PCR 是在采用 DNA 聚合酶進(jìn)行目的基因擴(kuò)增時(shí)，通過調(diào)整反應(yīng)條件來改變擴(kuò)增過程中的突變頻率，從而以一定的頻率向目的基因中隨機(jī)引入突變，獲得蛋白質(zhì)分子的隨機(jī)突變體。其關(guān)鍵在于對(duì)合適突變頻率的選擇，突變頻率太高會(huì)導(dǎo)致絕大多數(shù)突變?yōu)橛泻ν蛔儯瑹o法篩選到有益突變；突變頻率太低則會(huì)導(dǎo)致文庫中全是野生型群體。本產(chǎn)品基于以上原理研制。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)

易錯(cuò) PCR 是在采用 DNA 聚合酶進(jìn)行目的基因擴(kuò)增時(shí)，通過調(diào)整反應(yīng)條件來改變擴(kuò)增過程中的突變頻率，從而以一定的頻率向目的基因中隨機(jī)引入突變，獲得蛋白質(zhì)分子的隨機(jī)突變體。其關(guān)鍵在于對(duì)合適突變頻率的選擇，突變頻率太高會(huì)導(dǎo)致絕大多數(shù)突變?yōu)橛泻ν蛔?，無法篩選到有益突變；突變頻率太低則會(huì)導(dǎo)致文庫中全是野生型群體。本產(chǎn)品基于以上原理研制。

它具有下列特點(diǎn)：
1. 操作簡便；
2. 突變沒有趨向性，突變率穩(wěn)定，突變率為 0.66%；
3. 本產(chǎn)品只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物，對(duì)于1kb 以上的產(chǎn)物，建議分段擴(kuò)增。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR（sequential error-prone PCR）。

成分規(guī)格

產(chǎn)品組成
2×Error Prone PCR Mix　　　1.5 mL
10× MnCl2　　　　　　　　 300 μL

保存條件
-20℃可保存12個(gè)月

使用方法
1. 易錯(cuò)PCR體系　推薦反應(yīng)體系（30μl）

試劑

用量

模板 DNA

10－100ng

Primer F (10 μM)

1μl

PrimerＲ(10 μM)

1μl

2× Error Prone PCR Mix

15μl

10× MnCl2

3μl

ddH2O

Up to 30μl


2.易錯(cuò)PCR程序
按用戶已經(jīng)優(yōu)化的PCR條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的PCR，如果沒有優(yōu)化的PCR條件，可先嘗試下面的PCR程序。

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94℃

3min

30－60cycles

變性

94℃

30sec

退火

45℃

30sec

延伸

72℃

1min/kb

3. 結(jié)果檢測：反應(yīng)結(jié)束后取5 μl反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液，然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，檢測是否得到預(yù)期片段大小的PCR產(chǎn)物。
4. 膠回收易錯(cuò)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物、克隆并對(duì)單菌落進(jìn)行功能篩選或測序分析、如果需要增加突變率，可以突變后的DNA為模板，進(jìn)行連續(xù)易錯(cuò)PCR。
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