產(chǎn)品詳情
簡單介紹:
2 × Probe qPCR Mix是專用于探針法實時熒光定量 PCR 的預(yù)混體系,包含熱啟動DNA Polymerase、PCR 優(yōu)化的穩(wěn)定劑和增強劑、dNTPs 和 Mg2+,操作簡便,主要用于基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉(zhuǎn)錄后 cDNA 靶序列檢測,如基因表達(dá)分析,拷貝數(shù)分析,SNP 基因型分析等,適用于不同類型探針法熒光定量。
詳情介紹:
產(chǎn)品特點
2 × Probe qPCR Mix 是專用于探針法實時熒光定量 PCR 的預(yù)混體系,包含熱啟動DNA Polymerase、PCR 優(yōu)化的穩(wěn)定劑和增強劑、dNTPs 和 Mg2+,操作簡便,主要用于基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉(zhuǎn)錄后 cDNA 靶序列檢測,如基因表達(dá)分析,拷貝數(shù)分析,SNP 基因型分析等,適用于不同類型探針法熒光定量。
它具有下列特點:
它具有下列特點:
1. 高靈敏度:可以精-確定量低拷貝模板;
2. 高特異性:限度的減少引物二聚體和非特異性產(chǎn)物;
3. 有效性:擴(kuò)增效率高,CT 值更低。
成份規(guī)格
2×Probe qPCR Mix 1ml / 5×1ml
保存條件
-20℃可保存12個月。
使用方法
使用方法
注 意:
以下舉例為常規(guī)qPCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序,實際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化)
1. 根據(jù)以下表格配置反應(yīng)體系,總體積為20 μl
試劑 |
用量 |
終濃度 |
2×Probe qPCR Mix |
10μl |
1× |
正義引物 (10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
反義引物 (10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
探針(10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
模板 DNA |
x μl |
/ |
ddH2O |
Up to 20μl |
/ |
注 意:
1. 通常引物濃度以0.25 μM 可以得到較好結(jié)果,可以在 0.1 ~ 1.0 μM作為設(shè)定范圍的參考。
2. 使用的探針濃度,與使用的熒光定量 PCR 儀、探針種類、熒光標(biāo)記物質(zhì)種類有關(guān),實際使用時請參照儀器說明書,或各熒光探針的具體使用要求進(jìn)行濃度的調(diào)節(jié)。
3. 通常 DNA 模板的量以 10-100 ng 基因組 DNA 或 1-10 ng cDNA 為參照,因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數(shù)不同,可對模板進(jìn)行梯度稀釋,以確定佳的模板使用量。
2. qPCR 反應(yīng)程序,兩步法 PCR:
過程 |
溫度 |
時間 |
|
預(yù)變性 |
95℃ |
5min |
|
35-40cycles |
變性 |
95℃ |
15sec |
退火/延伸 |
60℃ |
30sec |
注 意:
建議采用兩步法 PCR 反應(yīng)程序,若因使用 Tm 值較低的引物等原因,得不到良好的實驗結(jié)果時,可嘗試進(jìn)行三步法 PCR 擴(kuò)增,退火溫度請以 55℃ - 65℃的范圍作為設(shè)定參考