產(chǎn)品詳情
簡單介紹:
干血斑基因組DNA提取試劑盒(0.1-1ML)本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng),提取干血斑 中的基因組 DNA。所提 DNA 分子純度高,可直接進(jìn)行 PCR、Real-Time PCR 和雜交等相 關(guān)分子生物學(xué)實驗,整個過程an全可靠、簡單快速。
詳情介紹:
產(chǎn)品及特點
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng),提取干血斑 中的基因組 DNA。所提 DNA 分子純度高,可直接進(jìn)行 PCR、Real-Time PCR 和雜交等相 關(guān)分子生物學(xué)實驗,整個過程an全可靠、簡單快速。
它具有下列特點:
它具有下列特點:
1. 簡便快捷:操作快速方便;
2. 穩(wěn)定可靠:得率高,純度好,重復(fù)性強。
成分規(guī)格
Buffer GTL |
15ml |
30ml |
60ml |
Buffer GL |
15ml |
30ml |
60ml |
Buffer EB |
10 ml |
10 ml |
30ml |
Buffer W1(concentrate) |
13ml |
26ml |
52ml |
Buffer W2(concentrate) |
15ml |
30ml |
60ml |
Proteinase K |
1ml |
2×1ml |
4×1 ml |
Spin Columnwith Collection Tubes |
50套 |
100套 |
200套 |
蛋白酶K 于-20℃, 其他組分室溫(15 - 25℃),可保存 12 個月。 |
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本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于其它用途 |
使用方法
自備試劑
無水乙醇、RNase A(可選)。
樣本采集、保存和運送
1. 樣本:按照濾紙干血斑采集方法進(jìn)行采集。
2. 樣本保存:經(jīng)上述采集的待測樣本可立即用于處理,或在密封,干燥(濕度低于30%), 2-8°C 條件下保存(此條件下可保存 5 年)。樣本運送時應(yīng)將濾紙干血斑密封,采用泡 沫箱加冰運輸。
提取步驟
(注 意:使用前請先在緩沖液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽)
1. 取三片 3×3 mm 的干血斑樣品到 1.5 ml 的離心管(自備)中,加入 200 ul Buffer GTL,
20 ul 蛋白酶 K ,混合均勻,56℃恒溫震蕩器中,900 rpm 恒溫震蕩 1 h。
2. 加入 200 ul Buffer GL 渦旋混勻,70℃恒溫震蕩器中,900 rpm 恒溫震蕩 10 min。
3. 加入 200 ul 無水乙醇,渦旋震蕩充分混勻,短暫離心收集管壁上的液體。
4. 將一吸附柱放入收集管中,將液體全部轉(zhuǎn)入到吸附柱中,10000 rpm離心30 s ,棄濾 液。
5. 向吸附柱中加入 500 ul Buffer W1 ,10000 rpm 離心 30 s ,棄濾液。
(注 意:按要求在 Buffer W1 中加入無水乙醇,用后及時蓋緊, 以防乙醇揮發(fā))
6. 向吸附柱中加入 600 ul 漂洗液 Buffer W2 ,10000 rpm 離心 30 s ,棄濾液。
(注 意:按要求在 Buffer W2 中加入無水乙醇,用后及時蓋緊, 以防乙醇揮發(fā))
7. 重復(fù)操作步驟 6 一次。
(注 意:此步不能省略,否則殘留乙醇會影響基因組 DNA 的后續(xù)使用)
8. 將吸附柱放回收集管中,12,000 rpm 離心 2 min ,以去除吸附膜上的乙醇。
9. 將吸附柱轉(zhuǎn)入一干凈的離心管中,向吸附膜的中間部位懸空滴加 20 - 50 ul Buffer EB, 室溫放置 2 min ,10000 rpm 離心 1 min ,收集 DNA。
(注 意:洗脫液體積不應(yīng)少于 20 μl ,體積過小影響回收效率。為增加基因組 DNA 的得率,可將離心 得到的溶液再次加入吸附柱中,室溫放置 2 min ,10000 rpm 離心 1 min 。洗脫液的 pH 對于洗脫效率 有很大影響。若用水作洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 7.0 - 8.5 范圍內(nèi),pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率)
注意事項
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 產(chǎn)生沉淀,可在 56℃水浴溶解。
2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致提取的 DNA 片段小,提取量下降。
3. 所有離心步驟均為臺式離心機,室溫下操作。