產(chǎn)品詳情
簡(jiǎn)單介紹:
培養(yǎng)細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞基因組 DNA 的提取。試劑盒采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解體系降解蛋白,結(jié)合硅膠膜特異吸附核酸的原理,可快速純化得到高質(zhì)量的基因組DNA。使用本試劑盒提取得到的基因組 DNA 無(wú)蛋白、核酸酶污染,可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
詳情介紹:
產(chǎn)品特點(diǎn)
本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞基因組 DNA 的提取。試劑盒采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解體系降解蛋白,結(jié)合硅膠膜特異吸附核酸的原理,可快速純化得到高質(zhì)量的基因組DNA。使用本試劑盒提取得到的基因組 DNA 無(wú)蛋白、核酸酶污染,可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
它具有下列特點(diǎn):
它具有下列特點(diǎn):
1. 簡(jiǎn)便快速,可快速獲得高純度的基因組 DNA;
2. 重復(fù)性好,產(chǎn)量高;
3. 完全去除污染物和抑制劑,便于下游應(yīng)用。
成分規(guī)格
Buffer GTL |
12ml |
25ml |
50ml |
Buffer GL |
12ml |
25ml |
50ml |
Buffer EB |
10ml |
10ml |
30ml |
Buffer W1(concentrate) |
13ml |
26ml |
52ml |
Buffer W2(concentrate) |
15ml |
30ml |
60ml |
Proteinase K |
1ml |
2×1ml |
4×1ml |
Spin Columnwith Collection Tubes |
50套 |
100套 |
200套 |
蛋白酶K 于-20℃, 其他組分室溫(15 - 25℃) , 可保存 12 個(gè)月 |
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本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于其它用途 |
使用方法
自備試劑
無(wú)水乙醇、RNase A(可選)。
(注 意:Buffer W1 和 Buffer W2 為濃縮液,按要求加入無(wú)水乙醇,用后及時(shí)蓋緊,以防乙醇揮發(fā))
1. 材料處理:
a. 如提取材料為懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,離心后棄上清,加入 200 μl Buffer GTL 緩沖液,振蕩至徹底懸浮。
b. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液,然后 10,000 rpm(-11,200×g)離心1 min,倒盡上清,加 200 μl 緩沖液 Buffer GTL,振蕩至徹底懸浮。
(注 意:如果需要去除 RNA,可加入 4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(客戶(hù)自備),振蕩15 sec,室溫放置 5 min。)
2. 加入 20 μl Proteinase K 溶液,充分混勻。
3. 加入 200 μl Buffer GL,充分混勻,56℃水浴或金屬浴處理10 min,期間每隔一段時(shí)間震蕩離心管,溶液變得清亮后短暫離心,以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
4. 加入 200 μl 無(wú)水乙醇,充分震蕩,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。
5. 將所得溶液和絮狀沉淀轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12,000 rpm 離心30 sec,棄收集管中的濾液。
6. 向吸附柱內(nèi)加入 500 μl Buffer W1,室溫 12,000 rpm 離心30 sec,棄收集管中濾液。(注 意:Buffer W1為濃縮液按要求加入無(wú)水乙醇,用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋,以防酒精揮發(fā))
7. 向吸附柱內(nèi)加入 600 μl Buffer W2,室溫 12,000 rpm 離心30 sec,棄收集管中濾液。(注 意:Buffer W2 為濃縮液按要求加入無(wú)水乙醇,用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋,以防酒精揮發(fā))
8. 向吸附柱內(nèi)加入 500 μl Buffer W2,室溫 12,000 rpm 離心30 sec,棄收集管中濾液。
9. 干燥。將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min,甩干殘留漂洗液。
9. 干燥。將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min,甩干殘留漂洗液。
(注 意:此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響質(zhì)粒的后續(xù)使用)
10. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 塑料離心管(自備)中,加入50 - 100 μl Buffer EB,室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min,離心管底溶液即基因組DNA。
(注 意:為增加洗脫效率,可將洗脫液在 60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫,可用NaOH調(diào)整其pH值在 7.0 - 8.5 之間,為了增加基因組 DNA 回收率,可將得到的溶液重新加入到離心管中,室溫放置2 min,再次離心收集)
注意事項(xiàng)
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 產(chǎn)生沉淀,可在 56℃水浴溶解。
2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段小,提取量下降。
3. 所有離心步驟均為臺(tái)式離心機(jī),室溫下操作。