動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
本試劑盒適用于動(dòng)物組織等基因組 DNA 的提取。試劑盒采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解體系降解蛋白,結(jié)合硅膠膜特異吸附核酸的原理,可快速純化得到高質(zhì)量的基因組DNA。使用本試劑盒得到的基因組 DNA 無蛋白、核酸酶污染,可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
它具有下列特點(diǎn):
1. 簡便快速,可快速獲得高純度的基因組 DNA;
2. 重復(fù)性好,產(chǎn)量高;
3. 完全去除污染物和抑制劑,便于下游應(yīng)用。
成分規(guī)格
Buffer GTL
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12ml
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25ml
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50ml
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Buffer GL
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12ml
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25ml
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50ml
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Buffer EB
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10ml
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10ml
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30ml
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Buffer W1(concentrate)
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13ml
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26ml
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52ml
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Buffer W2(concentrate)
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15ml
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30ml
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60ml
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Proteinase K
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1ml
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2×1ml
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4×1ml
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Spin Column with Collection Tubes
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50套
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100套
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200套
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蛋白酶 K 于-20℃, 其他組分室溫(15 - 25℃) , 可保存 12 個(gè)月
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本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于其它用途
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使用方法
自備試劑
無水乙醇、RNase A(可選)。
(注 意:Buffer W1 和 Buffer W2 為濃縮液,按要求加入無水乙醇,用后及時(shí)蓋緊,以防乙醇揮發(fā))
1. 稱取 20 mg 動(dòng)物組織(脾組織用量應(yīng)少 10 mg),先打碎處理為細(xì)胞懸液,然后10,000rpm(-11,200×g)離心 1 min,倒盡上清,加 200 μl Buffer GTL,振蕩至徹底懸浮。如果沒有勻漿儀,也可將組織切成細(xì)小碎塊,加 200 μl Buffer GTL。
(注 意:如果需要去除 RNA,可加入 4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(客戶自備),振蕩15 sec,室溫放置 5 min。)
2. 加入 20 μl Proteinase K 溶液,充分混勻,在 56℃水浴或金屬浴直至組織完全溶解。(注意:不同組織裂解時(shí)間不同,通常需 1 - 3 h 即可完成(鼠尾需要消化過夜,不會(huì)影響后續(xù)操作。)每小時(shí)顛倒混合樣品 2 - 3 次,用水浴或金屬浴振蕩器也可)
3. 加入 200 μl Buffer GL,充分混勻,70℃水浴或金屬浴處理10 min,期間每隔一段時(shí)間震蕩離心管,溶液變得清亮后短暫離心,以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
(注 意:Buffer GL 加入時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀,一般 70℃時(shí)會(huì)消失,不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),如溶液未變清亮,說明細(xì)胞裂解不徹底,可能導(dǎo)致提取的DNA量少或者提取的DNA不純)
4. 加入 200 μl 無水乙醇,充分震蕩,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。
5. 將所得溶液和絮狀沉淀轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12,000 rpm 離心30 sec,棄收集管中的濾液。
6. 向吸附柱內(nèi)加入 500 μl Buffer W1,室溫 12,000 rpm 離心30 sec,棄收集管中濾液。(注 意:Buffer W1為濃縮液按要求加入無水乙醇,用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋,以防酒精揮發(fā))
7. 向吸附柱內(nèi)加入 600 μl Buffer W2,室溫 12,000 rpm 離心30 sec,棄收集管中濾液。(注 意:Buffer W2為濃縮液,按要求加入無水乙醇,用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋以防酒精揮發(fā))
8. 向吸附柱內(nèi)加入 500 μl Buffer W2,室溫 12,000 rpm 離心30 sec,棄收集管中濾液。
9. 干燥。將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min,甩干殘留漂洗液。
(注 意:此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響質(zhì)粒的后續(xù)使用)|
10. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 塑料離心管(自備)中,加入50 - 100 μl Buffer EB,室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min,離心管底溶液即基因組DNA。
(注 意:為增加洗脫效率,可將洗脫液在 60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫,可用NaOH調(diào)整其pH值在 7.0 - 8.5 之間,為了增加基因組 DNA 回收率,可將得到的溶液重新加入到離心管中,室溫放置2 min,再次離心收集)
注意事項(xiàng)
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL產(chǎn)生沉淀 ,可在 56℃水浴溶解。
2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段小,提取量下降。
3. 所有離心步驟均為臺(tái)式離心機(jī),室溫下操作。