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成份 |
N+2 個(gè)樣品管 |
PCR 陰性對(duì)照 |
PCR陽(yáng)性對(duì)照 |
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PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
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Skalicky煙霜霉病菌PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
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N+2個(gè)樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
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PCR 陰性對(duì)照（水） |
-- |
18μL |
-- |
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PCR 陽(yáng)性對(duì)照（Skalicky煙霜霉病菌PCR陽(yáng)性對(duì)照1000倍稀釋液） |
-- |
-- |
18μL |
使用方法：
成份
N+2 個(gè)樣品管
PCR 陰性對(duì)照
PCR陽(yáng)性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0
各 20μL
20μL
20μL
Skalicky煙霜霉病菌PCR 引物混合液
各2μL
2μL
2μL
N+2個(gè)樣品DNA模板
各18μL
--
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PCR 陰性對(duì)照（水）
--
18μL
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PCR 陽(yáng)性對(duì)照（Skalicky煙霜霉病菌PCR陽(yáng)性對(duì)照1000倍稀釋液）
--
--
18μL
4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：
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過(guò)程 |
溫度 |
時(shí)間 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)（35 個(gè)循環(huán)） |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
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72℃ |
40 sec |
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延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。