果糖1,6二磷酸酶(FBP)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
果糖-1,6 二磷酸酶又稱果糖 1,6 二磷酸酯酶,催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和無機(jī)磷,在糖的異生代謝和光合作用同化物蔗糖的合成中起關(guān)鍵性的作用。
測(cè)定原理:
FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和無機(jī)磷,在反應(yīng)體系中添加的磷酸葡萄糖異構(gòu)酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH,340nm 下測(cè)定 NADPH 增加速率,即可計(jì)算 FBP 活性。
需自備的儀器和用品:
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理:
①總FBP酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
