海藻糖含量測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注?意: 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
海藻糖廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。由于海藻糖具有獨(dú)特的不同于其他碳水化合物的生物學(xué)特性,能在干旱、高溫、脫水、冷凍、高滲透壓及毒性物質(zhì)等惡劣環(huán)境下保護(hù)生物體細(xì)胞蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、核酸等組分不受損害。
測(cè)定原理:
蒽酮比色法。具有靈敏度高﹑簡(jiǎn)便快捷﹑適用于微量樣品的測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板﹑研缽、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。
海藻糖提取:
1、細(xì)胞處理:收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3S,間隔 10S,重復(fù) 30 次),室溫靜置 45min,振蕩 3~5 次,冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清。
2、組織的處理:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),冰浴勻漿,室溫靜置 45min,振蕩 3~5 次,冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清。
3、血清(漿)的處理:按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取 0.1mL 血清(漿)加入 1mL 提取液),冰浴勻漿,室溫靜置 45min,振蕩 3~5 次,冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清。
按照組織質(zhì)量(g):提取液1體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液1),進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min,棄上清,沉淀中加入1mL蒸餾水,充分震蕩混勻,12000g 4℃離心10min,棄上清,沉淀中加入1mL提取液2 充分混勻,4℃浸提過夜,12000g 4℃離心20min,取上清置冰上待測(cè)。
