單胺氧化酶(MAO)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100T/96S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官,特別是分泌腺、腦、肝臟,在無(wú)脊椎動(dòng)物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝,含量較低,具有重要的生理功能,其活性能反映的程度。此外,MAO活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂,從而引發(fā)多種。
測(cè)定原理:
MAO催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛,進(jìn)一步氧化成酸;底物在360nm處有特征吸收峰,測(cè)定360nm光吸收下降的速率,計(jì)算MAO活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
粗酶液提取:
1.稱取約0.1g樣品,加1 mL預(yù)冷的提取液一充分冰浴勻漿,1000g,4℃,離心10min,棄沉淀;把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管,10000g,4℃,離心30min,棄上清;加入1mL預(yù)冷的提取液二,震蕩混勻,16000g,4℃,離心40min,棄上清;沉淀加入預(yù)冷的1mL 試劑一,震蕩混勻,即粗酶液(可用于可溶性蛋白濃度測(cè)定)。
2.按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心10min,棄沉淀;把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管,10000g,4℃,離心30min,棄上清;加入1.0 mL預(yù)冷的提取液二,震蕩混勻,16000g,4℃,離心40min,棄上清;沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL 試劑一,震蕩混勻,即粗酶液(可用于可溶性蛋白濃度測(cè)定),取上清置于冰上待測(cè)。
3.血清:直接測(cè)定。
